英语翻译To show that HAX-1 degradation is part of the apoptotic process and any involvement Omi may have,we used the ucf-101 inhibitor.ucf-101 is a specific inhibitor of the proteolytic activity of Omi and has been described previously (13).When

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/24 09:24:56

英语翻译To show that HAX-1 degradation is part of the apoptotic process and any involvement Omi may have,we used the ucf-101 inhibitor.ucf-101 is a specific inhibitor of the proteolytic activity of Omi and has been described previously (13).When
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To show that HAX-1 degradation is part of the apoptotic process and any involvement Omi may have,we used the ucf-101 inhibitor.ucf-101 is a specific inhibitor of the proteolytic activity of Omi and has been described previously (13).When HK-2 cells were treated with cisplatin in the presence of ucf-101,the percentage of apoptotic cells decreased and the inhibitor significantly blocked HAX-1 degradation.This effect was more pronounced when a higher concentration of the inhibitor was used.
To confirm the specificity of the inhibitor in this system and exclude the possibility that another protease rather than Omi is involved in HAX-1 cleavage,we used cell lines derived from mnd2 mice (9).The parent cell line (mnd2-MSCV) derived from mouse embryo fibroblasts has no detectable Omi proteolytic activity (9).The same cell line has been transfected with wild type human Omi cDNA (mnd2-MSCV-Omi) and expresses high levels of active Omi protein (14).We found that in mnd2-MSCV cells,when induced to undergo apoptosis with various stimuli,the number of apoptotic cells was very low.Furthermore,no detectable cleavage of HAX-1 was observed.This is in contrast with the mnd2-MSCV-Omi cells where apoptosis was robust,and HAX-1 levels were inversely proportional to the degree of apoptosis.This experiment clearly shows that Omi is solely responsible for HAX-1 cleavage,which is essential for apoptosis under the conditions used in these experiments.HAX-1 subcellular localization depends on cell type (21,30) and has been reported to be present in the mitochondria,cytoplasm,or plasma membrane (10,21,22,30).We performed subcellular fractionation to investigate where HAX-1 cleavage by Omi takes place.We found that,in HEK293 cells,HAX-1 was predominantly present in the mitochondria,and this localization did not change in response to apoptotic stimuli.This suggests that Omi can initiate apoptosis in the mitochondria by cleaving HAX-1 protein.This is in accord with a recent study that shows Omi can induce apoptosis in human neutrophils treated with TNF- without being released from the mitochondria (7).Although several studies clearly define HAX-1 as an anti-apoptotic protein,the mechanism of its function is unknown.HAX-1 has sequence similarity to Bcl-2 family of proteins (10,22).

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为了表明HAX-1 的降解是凋亡过程的一部分以及OMI可能的参与,我们用ucf-101抑制剂.ucf-101是此前报道过的(13)卵母细胞成熟抑制因子蛋白酶解活性的一种特异性抑制剂.当HK-2 细胞在ucf-101的存在下用顺铂处理时,凋亡细胞百分比下降,而且这种抑制剂明显阻止了HAX-1的降解.当抑制剂浓度加大时这种效应更加突出.
为了证实这种抑制剂在本系统中的特异性,并排除其他蛋白酶而不是OMI 涉及HAX-1酶切的可能性,我们使用mnd2 小鼠衍生的细胞系(9).小鼠胚胎成纤母细胞系(mnd2-MSCV)没有可检测的OMI 蛋白酶活性(9).相同的细胞系被转染到野生型人类OMI的cDNA (mnd2-MSCV-卵母细胞成熟抑制因子) 中,表达了大量的活性OMI蛋白(14).我们发现mnd2-MSCV细胞用各种刺激剂诱导凋亡时,凋亡细胞的数量非常低.进一步讲,没有观察到可检测的HAX-1酶切.这和细胞凋亡很旺盛的mnd2-MSCV-OMI细胞相反,并且HAX-1含量和细胞凋亡水平呈反比关系.该试验清楚地表明了卵母细胞成熟抑制因子单独决定HAX-1的酶切,在本实验使用的条件下对于细胞凋亡是必须的.HAX-1的亚细胞位置取决于细胞形状(21,30),并且已经有报道说可以存在于线粒体、细胞质或质膜 (10、21、22、30)中.我们对细胞亚组分进行了分离操作来研究OMI酶切HAX-1 蛋白的位点.我们发现HEK293 细胞中的HAX-1蛋白主要存在于线粒体,并且这个位点不随刺激剂反应的改变而变化.这暗示着卵母细胞成熟抑制因子靠酶切HAX-1 蛋白来启动线粒体中的细胞凋亡.这和最近的研究是一致的,该研究表明卵母细胞成熟抑制因子能诱导用TNF处理的人类神经多肽的凋亡而不从线粒体中释放出来(7).尽管几个研究清楚地把HAX-1界定为一种抗凋亡蛋白,它发挥功能的机理仍然未知.HAX-1 和Bcl-2蛋白家族有序列相似性 (10,22).

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为了要表示 HAX-1 降格是 apoptotic 程序的部份，而且任何的牵涉 Omi 可能有,我们用了 ucf-101 抑制剂。 ucf-101 是 Omi 的产生蛋白水解活动的一个特定抑制剂和已经在先前被描述。 (13) 当 HK-2 细胞在 ucf-101 之前被以 cisplatin 治疗的时候， apoptotic 细胞的百分比减少了，而且抑制剂重要地阻塞了 HAX-1 降格。当抑制剂的较高的集中被用的时候，这效果更显着。
为了确定这一个系统的抑制剂的特异性而且排除可能性：另外的一个蛋白并非 Omi 参与 HAX-1 卵裂, 我们二手的细胞线起源于 mnd 2只老鼠了.(9) 父母细胞线 (mnd 2 MSCV 的) 起源于 , 老鼠胚胎成纤维细胞没有可发觉的 Omi 产生蛋白水解的活动。 (9) 相同的细胞线已经用野性的类型是 transfected 人类的 Omi cDNA(mnd 2 MSCV 的-Omi) 而且表达高度活跃的 Omi 蛋白质。 (14)我们在 mnd 中发现那 2 MSCV 的细胞, 当感应的时候用各种不同的刺激遭受 apoptosis, apoptotic 细胞的数字非常低。此外， HAX-1 的没有可发觉卵裂被观察。这是与 mnd apoptosis 是强健的，而且 HAX-1 水平反的成比例 apoptosis 的程度的 2 MSCV -Omi 细胞相反。这实验清楚地表示 Omi 独自地负责 HAX-1 卵裂,这在被用于这些实验的情况之下对 apoptosis 是必要的。 HAX-1 次格状自动化局限仰赖细胞类型 (21,30) 和已经被报告存在于 mitochondria ，细胞质或血浆薄膜。 (10,21,22,30) 我们运行了次格状自动化分别调查 Omi 的 HAX-1 卵裂发生的地方。在 HEK293 细胞, 我们发现,HAX-1 在 mitochondria 中是居多出现，而且这一个局限没有回应 apoptotic 刺激改变。这建议 Omi 藉由劈开 HAX-1 蛋白质能在 mitochondria 中开始 apoptosis 。这与表示 Omi 能在被以 TNF 治疗的人类的好中性白血球中引诱 apoptosis 的一项最近的研究一致- 没有从 mitochondria 被释放.(7) 虽然一些研究清楚地定义如反 apoptotic 蛋白质的 HAX-1 ，但是它的功能的机制是未知的。 HAX-1 有对蛋白质的 Bcl-2 科的序列相似性。 (10,22)

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表示, HAX-1 退化是apoptotic 过程的一部分并且任一介入Omi 可以有, 我们曾经ucf-101 抗化剂ucf-101 是Omi 的蛋白水解的活动的一种具体抗化剂和早先被描述了(13) 。当HK-2 细胞被对待了与cisplatin 在ucf-101 面前, apoptotic 细胞的百分比减少了并且抗化剂极大阻拦了HAX-1 退化。这个作用是更加发出音的当抗化剂的更高的浓度被使用了。证实抗化剂的特异性在这个系统和排除可能性, 其它蛋白酶而不是Omi 被介入在HAX-1 卵裂, 我们曾经细胞线从mnd2 老鼠被获得(9) 。父母细胞线(mnd2-MSCV) 从老鼠胚胎成纤维细胞被获得没有可发现的Omi 蛋白水解的活动(9) 。同样细胞线是transfected 以狂放的型人的Omi DNA (mnd2-MSCV-Omi) 并且表达高水平活跃Omi 蛋白质(14) 。我们发现在mnd2-MSCV 细胞里, 当导致接受apoptosis 与各种各样的刺激, apoptotic 细胞的数量是非常降低。此外, HAX-1 可发现的卵裂未被观察。这是与apoptosis 健壮的mnd2-MSCV-Omi 细胞对比, 并且HAX-1 水平与程度相反地是比例apoptosis 。这个实验清楚地表示, Omi 负责单一地对HAX-1 卵裂, 是根本的为apoptosis 在条件下被使用在这些实验。HAX-1 亚细胞地方化取决于细胞类型(21, 30) 并且被报告是存在在线粒体、细胞质, 或血浆膜(10, 21, 22, 30) 。我们执行亚细胞分馏调查HAX-1 卵裂由Omi 发生的地方。我们发现, 在HEK293 细胞里, HAX-1 是主要地存在在线粒体, 并且这地方化没有改变以回应apoptotic 刺激。这建议, Omi 可能创始apoptosis 在线粒体由劈开HAX-1 蛋白质。这是与显示的一项最近研究一致Omi 可能导致apoptosis 在人的嗜中性被对待与TNF- 没有从线粒体被发布(7) 。虽然几项研究清楚地定义HAX-1 作为anti-apoptotic 蛋白质, 它的作用机制是未知的。HAX-1 有序列相似性对Bcl-2 家庭蛋白质(10, 22) 。

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