蛋白质盐析过程中应注意什么

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/06 05:05:43

蛋白质盐析过程中应注意什么
蛋白质盐析过程中应注意什么

蛋白质盐析过程中应注意什么
盐析：当盐浓度增高到一定值时,蛋白质的溶解度逐渐下降,直至蛋白质析出.
1) 盐的选择
蛋白质沉淀时,常用（NH4)2SO4
优点：溶解度大,且对温度不敏感；分级效果好；有稳定蛋白质结构的作用；价廉,废液可作肥料.
缺点：沉淀后样品需脱盐.
2) （NH4)2SO4盐析
固体法：搅拌下,少量多次加入
饱和溶液法:在蛋白质溶液中加入预先调好pH的（NH4)2SO4溶液.
透析法:将盛蛋白质溶液的透析袋放入一定浓度的（NH4)2SO4溶液中,通过透析作用改变蛋白质溶液中的盐浓度.使用于小体积样品.
影响盐析的因素:
A、盐析常数Ks的影响：
Cohn方程式：lgS=β－Ks×M
Ks：盐析常数,与T、pH有关,与蛋白质及盐的种类有关
Ks越大－－△S变化大－－盐析效果好
B、pH的影响
C、蛋白质纯度和浓度的影响
D、其他因素的影响：
金属离子：加EDTA－Na2溶液
脱盐:
透析方法：
搅拌下,3hr平衡,样品液：透析液＝1:10；
或静止,过夜,样品液：透析液＝1:20.
检查：脱（NH4)2SO4 ：用10%BaCl2检查
脱NaCl ：用10%AgNO3检查

用于盐析的中性盐以硫酸铵为最佳因为它在水中的溶解度很高而溶解度的温度系数较低考虑到大量的盐加入水溶液中所引起的体积变化需要知道盐的比容

重金属盐等使蛋白质变质

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