作业帮植物组织培养的培养基如何抑制杂菌的污染呢?有时候外植体消毒不严,有时候是培养很长时间了还发生感染,这该怎么办呢?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/26 14:25:12
植物组织培养的培养基如何抑制杂菌的污染呢?有时候外植体消毒不严,有时候是培养很长时间了还发生感染,这该怎么办呢?
植物组织培养的培养基如何抑制杂菌的污染呢?
有时候外植体消毒不严,有时候是培养很长时间了还发生感染,这该怎么办呢?
植物组织培养的培养基如何抑制杂菌的污染呢?有时候外植体消毒不严,有时候是培养很长时间了还发生感染,这该怎么办呢?
这就要要求你在配制培养基和材料的切取、接种时要求严格些,些许心得分享下：
培养材料及消毒
1、取材季节的影响：大多数植物应在其生长开始的季节采样, 生长末期或已进
入休眠期, 则外植体对诱导反应迟钝或无反应.
2、器官的生理状态和发育年龄：沿植物的主轴, 越向上的部分所形成的器官其
3 、生长的时间越短, 其生理年龄也越老, 越接近发育上的成熟, 越易形成花器官.反之, 越向下,其生理年龄越小.木本植物的组织培养中, 以幼龄树的春梢嫩枝段或基部的萌条较好, 下胚轴与具有3 对～4 对真叶的嫩茎段, 生长效果也较好 .一般情况下, 幼年组织比老年组织具有较高的形态发生能力.
3、材料大小的影响：材料越小成活率越低, 茎尖培养存活的临界大小应为一个茎尖分生组织带1 个～2 个叶原基, 约0 .2mm～0 .3mm 大小.叶片、花瓣等约为5mm2 , 茎段则长约0 .5mm.因此
, 除非用于去除病毒否则不宜将外植体切的过小.但并不是说外植体越大越好, 外植体过大易造成污染, 有实验证明外植体越大污染率越高.
4、材料的灭菌：一般是组织越大越易污染, 夏季比冬季带菌多,甚至不同年份污染的情况也有区别.取材最好选在中午或下午, 避开阴雨天取材可减少污染率.消毒是为了消灭病菌, 以保证无菌组织培养的进行.但不同植物及一株植物不同部位的组织, 其带菌程度不同, 它们对不同种类、不同浓度的消毒剂的敏感度也不一样.最初所使用的消毒剂种类, 浓度及消毒时间的长短都要进行摸索, 以达到最佳的消毒效果. 材料有绒毛最好在消毒液中加入几滴吐温- 80 ,对与难消毒的根及地下部位材料可将其浸入消毒液中进行抽气减压, 以帮助消毒液的渗入, 从而达到彻底灭菌
的目的.潘学峰等( 1998) 报道, 12% 的双氧水+ 0 .1%的升汞混合液对南方地下茎生姜灭菌10min 的效果最好.
材料的接种
1、接种室的消毒：植物组织培养技术实际上是一种无菌操作和无菌培养技术, 做好接种室的消毒是至关重要的.污染的主要来源是空气中的细菌和真菌孢子, 因此, 每次接种前应进行地面的清洁卫生工作, 并用70%酒精喷雾使空气的灰尘沉降, 并用紫外线灯照射20min.接种前超净工作台面要用新洁尔灭或酒精擦洗,并定期清洗过滤膜, 以延长使用寿命.
2、 无菌操作要求：工作人员使用的工作服、帽子、口罩等, 要经常保持干净, 并定期进行消毒, 即将洗净、晾干的衣帽、口罩等用纸包好后与培养基一起进行高压灭菌.工作人员的头发、衣服、手指中都带有许多杂菌, 为此要穿上工作服, 戴上帽子, 也必须剪除指甲, 并用肥皂擦洗, 最好再在新洁尔灭溶液中浸泡10 min , 接种操作前则用70%酒精擦洗.工作人员的呼吸所产生的污染, 主要是 在接种时谈话或咳嗽所引起的, 因此, 在操作时应禁止谈话并应戴上口罩.
3、材料的分离、切取和接种
切割动作要快, 防止挤压使材料受损伤而招致培养失败, 也要避免使用生锈的刀片, 以防止氧化现象产生.接种时要防止交叉污染的发生,刀和镊子等接种工具使用一次应放入70% ( 或95%)酒精中浸泡, 然后灼烧放凉备用. 接种时轻轻取下封口纸, 动作要慢以免气流冲入瓶中造成污染.将瓶口靠近酒精灯火焰, 瓶口倾斜, 以免空气中的微生物落入瓶中,将瓶口外部在灯焰上燎数秒钟, 将灰尘杂物等固定在原处, 然后用镊子将外植体送入瓶中, 材料在培养容器内的分布要均匀, 以保证必要的营养面积和光照条件.茎尖、茎段等基部插入固体培养基中, 叶片通常将叶背接触培养基, 这是由于叶背气孔多, 利于吸收水分和养分的缘故.
外植体有共生微生物时，一般很难消毒的，实际操作时，一旦发现有微生物污染，将没有污染的外植体及时移入新培养基中；